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SH-SY5Y细胞是从骨髓活检衍生品系SK-N-SH细胞中克隆出来的，而克隆过程涉及选择表达神经元样特征的单个细胞或细胞簇。 SK-N-SH细胞的成神经细胞样亚克隆被命名为SH-SY细胞，后来被亚克隆为SH-SY5细胞，接着再进行第三次亚克隆以产生SH-SY5Y细胞，最早于1978年报导。
SH-SY5Y细胞通常以两种不同的方式在组织培养中生长。第一种方式是长成团块的细胞漂浮在培养基中，而第二种方式是长成团块的细胞粘在碟子上。SH-SY5Y细胞可以在体外自发地在两种表型之间转化，即成神经细胞样细胞和上皮样细胞，尽管目前尚不清楚该过程的机制。然而，鉴于其形态及拥有将细胞分化为神经元系的能力，该细胞系被认为是N型。这与同样来自SK-N-SH细胞的S型亚克隆细胞系SH-EP细胞相反 。将具有类神经突的短刺状细胞从这些粘附的团块中移出，并且进行观察后会发现SH-SY5Y细胞具有异常的1号染色体，当中有一个1q节的副本，而该副本被称为1q染色体三倍体（trisomy 1q）。SH-SY5Y细胞既通过有丝分裂繁殖，又通过将神经突延伸到周围区域而分化。细胞分裂时，聚集的细胞看上去与分化后的细胞有很大的不同，以至于刚入行的科学家经常将此现象视为细胞被污染。分裂中的SH-SY5Y细胞可以形成细胞簇，提醒它们的癌性，但是某些使用到视黄酸、脑源性神经营养因子或Tissue plasminogen activator的治疗方法会令细胞树突状化及分化。此外，视黄酸诱导可以抑制细胞生长，并且增加SH-SY5Y细胞中去甲肾上腺素的产生 。
目前最常使用的培养方式是伊格尔最低限度必需培养基（DMEM）和Ham's tissue culture medium的1：1比例混合物，以及10％补充性胎牛血清。DMEM通常包含1.5g/L 碳酸氢钠、2.0 mM L-麸醯胺酸、1.0 mM丙酮酸钠，以及0.1 mM非必需氨基酸。SH-SY5Y细胞必要在37℃、95％的空气和5％的二氧化碳的环境下生长，并且被建议在烧瓶中培养SH-SY5Y细胞，而烧瓶已涂上有利于细胞粘附的涂层。这将有助于神经母细胞瘤的细胞分化和树突化。这些细胞通常非常顽强，可以在最广泛使用的培养基中生长。随著细胞传代次数的增加，神经元特征会出现丧失，故而被建议不要在第20代后，使用或验证去甲肾上腺素的摄取，或者神经元肿瘤标志物等特定特征。除此之外，为了获得具有神经元表型的衍生细胞，已经有许多报道描述了多种的分化方案。早期对SH-SY5Y细胞的研究表明，利用星形孢菌素可使其分化为神经元表型，后来被表征为儿茶酚胺样。因此，应该仔细表征不同浓度的星形孢菌素对SH-SY5Y细胞的作用，以正确解释将星形孢菌素用作分化剂或凋亡诱导剂的研究。
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