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克罗斯河大猩猩(Gorilla gorilla diehli)是西部大猩猩的亚种,分布在尼日利亚及喀麦隆的热带雨林。相对于较著名的西部低地大猩猩,克罗斯河大猩猩是所有大猩猩中,甚至灵长目中,最为濒危。
克罗斯河大猩猩与西部低地大猩猩在头颅骨及牙齿上有分别,此外在四个大猩猩亚种中,克罗斯河大猩猩的头与肩部有更明显的栗红色毛发。
野生克罗斯河大猩猩的数量估计只余250-300头,分布于9-11个族群中。最接近牠们的西部低地大猩猩族群位于250公里以外。由于失去栖息地及被猎杀为丛林肉,故牠们的数量严重减少。
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SH-SY5Y细胞是从骨髓活检衍生品系SK-N-SH细胞中克隆出来的,而克隆过程涉及选择表达神经元样特征的单个细胞或细胞簇。 SK-N-SH细胞的成神经细胞样亚克隆被命名为SH-SY细胞,后来被亚克隆为SH-SY5细胞,接着再进行第三次亚克隆以产生SH-SY5Y细胞,最早于1978年报导。
SH-SY5Y细胞通常以两种不同的方式在组织培养中生长。第一种方式是长成团块的细胞漂浮在培养基中,而第二种方式是长成团块的细胞粘在碟子上。SH-SY5Y细胞可以在体外自发地在两种表型之间转化,即成神经细胞样细胞和上皮样细胞,尽管目前尚不清楚该过程的机制。然而,鉴于其形态及拥有将细胞分化为神经元系的能力,该细胞系被认为是N型。这与同样来自SK-N-SH细胞的S型亚克隆细胞系SH-EP细胞相反 。将具有类神经突的短刺状细胞从这些粘附的团块中移出,并且进行观察后会发现SH-SY5Y细胞具有异常的1号染色体,当中有一个1q节的副本,而该副本被称为1q染色体三倍体(trisomy 1q)。SH-SY5Y细胞既通过有丝分裂繁殖,又通过将神经突延伸到周围区域而分化。细胞分裂时,聚集的细胞看上去与分化后的细胞有很大的不同,以至于刚入行的科学家经常将此现象视为细胞被污染。分裂中的SH-SY5Y细胞可以形成细胞簇,提醒它们的癌性,但是某些使用到视黄酸、脑源性神经营养因子或Tissue plasminogen activator的治疗方法会令细胞树突状化及分化。此外,视黄酸诱导可以抑制细胞生长,并且增加SH-SY5Y细胞中去甲肾上腺素的产生 。
目前最常使用的培养方式是伊格尔最低限度必需培养基(DMEM)和Ham's tissue culture medium的1:1比例混合物,以及10%补充性胎牛血清。DMEM通常包含1.5g/L 碳酸氢钠、2.0 mM L-麸醯胺酸、1.0 mM丙酮酸钠,以及0.1 mM非必需氨基酸。SH-SY5Y细胞必要在37℃、95%的空气和5%的二氧化碳的环境下生长,并且被建议在烧瓶中培养SH-SY5Y细胞,而烧瓶已涂上有利于细胞粘附的涂层。这将有助于神经母细胞瘤的细胞分化和树突化。这些细胞通常非常顽强,可以在最广泛使用的培养基中生长。随著细胞传代次数的增加,神经元特征会出现丧失,故而被建议不要在第20代后,使用或验证去甲肾上腺素的摄取,或者神经元肿瘤标志物等特定特征。除此之外,为了获得具有神经元表型的衍生细胞,已经有许多报道描述了多种的分化方案。早期对SH-SY5Y细胞的研究表明,利用星形孢菌素可使其分化为神经元表型,后来被表征为儿茶酚胺样。因此,应该仔细表征不同浓度的星形孢菌素对SH-SY5Y细胞的作用,以正确解释将星形孢菌素用作分化剂或凋亡诱导剂的研究。
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1969年1月21日,米格尔·基思在奥马哈入伍美国海军陆战队预备队。1969年5月1日,加入海军陆战队正规部队。1969年5月2日,前往加利福尼亚州圣迭戈的海军陆战队新兵基地进行训练,同年7月17日完成新兵训练。接着转到加利福尼亚州彭德尔顿营进行个人战斗训练,9月18日完成训练。
1969年11月6日,米格尔·基思到达南越。分配到海军陆战队第3远征军第一联合行动小组,担任步兵。1970年5月8日,在广义省的战斗中担任机枪手,在身负重伤的情况下依然向敌人发起进攻,使得其所在排能够击溃数量上占优势的敌军攻击,米格尔·基思在这次行动中被敌人的火力击中牺牲。
米格尔·基思于1969年8月1日晋升为一等兵,并于1970年4月1日晋升为下士。
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