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稳定的过渡态可以降低反应所需的活化能，从而促进催化作用。例如，胰凝乳蛋白酶的蛋白酶含有负氧离子洞，以稳定蛋白质水解过程中形成的四面体中间阴离子，并保护底物中带负电的氧气不受水分子的影响。

另外，负氧离子孔也可以促进底物的进入与稳定。如果底物没有到达反应位点，负氧离子孔就找不到可供稳定化的目标，从而产生空阻直到底物到位（例如血红蛋白中的BPG）。

催化多步反应的酶可以具有多个负氧离子洞，以稳定反应中的不同过渡态。

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