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随着游戏的继续，敌人的数量会增加，并且难度增加。火球会从屏幕周围弹出或者从一端直接至另一端。平台下面会形成冰层，掉落时会松动。玩家可以在奖励版获得额外的金币和生命，并且次关没有敌人出现。在这些关卡之后，“POW”会重新出现并恢复。

《马里奥兄弟》是由两位先前制作《大金刚》的宫本茂和横井军平制作。在《大金刚》中，马里奥从太高处跌落会失去生命。横井建议宫本让马里奥可以从任意高度掉落。他认为这个对于一个游戏来说并没有什么。宫本最终同意了，认为他可以使人物具有一些超人能力。他设计了一个蹦蹦跳跳的马里奥，这个令他非常满意的原型。在经过横井建议之后，底下需要战斗的敌人被引入。经过观察，敌人能在在多个平台运作。然而直接击败敌人被认为过于简单。制作者修改了内容，要求在底部使敌人翻转，然后再来触碰敌人来完成击败。这个就是他们引入海龟作为敌人的原因。海龟是能够从底部进行撞击。由于马里奥在《大金刚》中的外形是戴着一顶帽子和厚厚的胡子。宫本茂认为他是一个水管工，而不是一个木匠。他设计这个游戏来反映这一点。另外一个因素是游戏的设置。这是一个巨大的水管网络，他们必须进行职业上的改变。

有一个比较流行的故事关于游戏人物从水管工至现今的马里奥。一个意大利裔美国房东Mario Segale闯入任天堂美国办公室要求一个职员支付房租。他们决定以马里奥的名字命名游戏中的水管工。宫本也觉得这个游戏最好的设定场景是纽约，由于其地下拥有错综复杂的排污管道网络。管道受到多个漫画影响，在这其中宫本叙述到具有水管的废弃物品地底。在这个游戏中，他们允许敌人通过这个进入和退出画面，来避免敌人堆积在底部。水管的颜色为绿色，任天堂已故的总裁岩田聪称这个为不常见的颜色。这个来自于宫本具有有限的调色，并且希望都是多彩色的。他补充说到绿色是最好的颜色是因为当两个阴影合并时，它运行的很好。

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缺铁（也称铁缺乏症或者血铁过少症状）是最受关注的营养元素缺乏症之一。在人体内，铁存在于所有的细胞并且参与维持多项生理机能，比如以血红蛋白的形式从肺里运输氧到其他器官中，比如以细胞色素的形式在细胞内传输电子，再比如在各种器官中作为酶反映的重要部分。体内缺铁会妨害这些生理机能的正常进行，并且导致疾病甚至死亡。

缺铁性贫血是缺铁的直接后果。孩子和未绝经的女性容易患该种疾病。

男性体内的平均铁量是3.8g，女性体内的平均铁量是2.3g. 在血浆中，铁被紧密的束缚在运铁蛋白中。细菌和人体细胞一样，需要铁元素以维持生长。因此，限制铁在细菌中的生物利用度可以防止细菌的生长。在发烧的时候，控制细菌生长的一种方法就是通过暂时性的缺铁。

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